重组黑曲霉发酵生产蛋白酶K技

由真菌(林伯氏白色念球菌,Tritirachium album Limber)产生的蛋白酶K，是一种枯草蛋白酶类的高活性,切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的一般降解。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。主要用于基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶，也可以用于提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质。蛋白酶K于1989年在细菌中成功表达并投入市场。

此项目新开发出来由黑曲霉生产的蛋白酶K。其蛋白酶K是分泌型，主要产于胞外，因此纯化过程简单，成本较低。

市场前景

初步估计蛋白酶K市场已超过百万美元。目前中国市场上大部分蛋白酶K都是来源于国外,最主要的是Merck，Roche，Fermentas和Amresco，其中Roche，Fermentas是用毕赤酵母表达的蛋白酶K(专利号: US 7,368,274)。国外价格在500元-600元左右/每100mg (5000元/克)。国内进口蛋白酶K每克售价在3000元到4000元。目前国内有一家公司（金普诺安蛋白质工程技术（北京）有限公司）针对蛋白酶K基因进行了突变并在毕赤酵母中成功表达。

技术特点

本项目构建了高效表达蛋白酶K的工程菌株，获得的蛋白酶K的酶活已达到>4000单位/毫升(福林法)，蛋白量接近1克/升(蛋白质电泳胶)，目前已经申请专利1项。

投资与效益分析

目前，纯化后的蛋白酶K国外市场价格每100mg 在500元-600元 (5000元/克)，本项目蛋白酶K的发酵成本低于20元/克，提纯成本预计为100元/克，总成本将低于300元/克。

目标客户为Merck，Roche，Fermentas，sigma和国内基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒等公司。